助力结直肠癌精准诊疗 结直肠癌精准治疗

　　11月25日，以“精准为盟，伴随于行”为主题的默克第2届结直肠癌精准联盟峰会在上海召开，睿昂基因（688217）作为默克精准联盟成员之一，公司董事长熊慧与其他同道一起开启了“规范化结直肠癌精准检测之路”的仪式。

　　睿昂基因创始人熊慧博士出席此次仪式

　　据悉，结直肠癌一直以来高居我国癌症发病率和死亡率的前五，对国民健康造成了严重威胁。结直肠癌是来源于结直肠黏膜上皮的癌性病变，致死性强，严重威胁人类健康。其早期症状不明显，隐匿性强，故基因标志物检测被认为是结直肠癌最有效的预警方式。

　　睿昂基因研发负责人柯中和表示，分子标志物检测能够助力结直肠癌精细化管理，目前指南里针对结直肠癌，强烈推荐的分子标志物主要是以下三个：RAS突变，BRAF突变，微卫星不稳定MSI和DNA错配修复MMR缺陷。其中，RAS、BRAF参与EFGR信号转导通路，两者发生突变均会导致EGFR单抗治疗失效；而微卫星不稳定MSI和DNA错配修复MMR缺陷，则会导致肿瘤细胞抗原性增强，从而对免疫检查点抑制剂（ICIs）治疗产生更好的效果。因此，这些分子标志物的检测对于结直肠癌精准治疗方案制订至关重要。

　　柯中和指出，目前临床上针对结直肠癌初诊患者，可通过IHC、FISH、一代测序等检测技术进行标志物检测。但对于组织样本难以获取或突变占比不高的患者，则亟需一种更好的检测技术，而ddPCR检测可弥补这一不足，尤其是基于游离DNA样本的检测，更是可提前监测患者耐药及复发出现，为后续临床治疗方案提供指导，帮助患者受益。对于这些满足临床需求的检测技术的如何尽快落地，就需要和临床和药企一起推动，以伴随诊断试剂盒的形式参与药企的靶向药物临床试验，走创新通道使药物和伴随诊断能尽快双双落地实现转化，最终使患者尽早受益。

　　美国国立综合癌症网络（NCCN）和中国临床肿瘤学会（CSCO）指南指出，MSI/MMR、RAS和BRAF是结直肠癌常检测的三个基因，并推荐结直肠癌确诊时需做MSI/MRR基因突变的检查，若是转移性或复发性肠癌则需做RAS、BRAF基因突变的检测。KRAS基因作为公认的癌基因，其突变与酪氨酸激酶抑制剂等靶向药物的原发耐药有关。临床上，西妥昔单抗注射液等靶向药物对KRAS野生型患者显示出较好的治疗效果，而对KRAS基因突变型患者无效。同时，NRAS基因突变可能降低西妥昔单抗注射液的药物效果。并且研究表明BRAF基因突变同样与结直肠癌的靶向药物耐药有关，通常认为BRAF基因突变的患者对靶向药物效果不佳，且BRAF突变与患者预后密切相关。另外，NCCN指南指出循环肿瘤DNA（ctDNA）动态监测有助于提前预警结直肠癌术后复发和转移。

　　据介绍，睿昂基因以微滴式数字PCR（ddPCR）检测平台为主导，开发研制的KRAS、NRAS和BRAF基因突变检测试剂盒（ddPCR法）能够精确检测组织和外周血游离DNA样本中突变频率0.1%的基因突变情况。该试剂盒由KRAS G12/13反应液、KRAS Q61反应液、NRAS G12/13反应液、NRAS Q61反应液、BRAF V600反应液（具体位点如表1所示）以及ddPCR MIX3组成。KRAS G12/13反应液、KRAS Q61反应液、NRAS G12/13反应液、NRAS Q61反应液和BRAF V600反应液含有相应检测靶标片段的引物和探针；ddPCR MIX3含扩增所需的热启动酶、dNTPs、MgCl2、buffer和微滴稳定剂，用于微滴制备后形成热稳定的油包水微滴，并确保靶标片段在微滴中进行PCR扩增。搭配一体化的数字PCR系统（将微滴制备、PCR扩增、微滴读取与分析集成），待芯片上机后可自动将待测的样本DNA、引物、探针以及ddPCR MIX3（热启动酶、dNTPs、MgCl2、buffer和微滴稳定剂）的混合液分隔在均匀的纳升级微滴内，在每个微滴中PCR反应都独立进行。扩增完毕，系统自动运行至分析模块进行荧光读取，通过显微光学系统拍摄双色荧光图像，或使微滴依次通过双色光学检测系统。运用泊松分布原理计算阳性和阴性微滴的数量及阳性微滴的比例，最终分析软件可计算出待检靶分子的浓度或拷贝数。